مطالعه تغييرات آپوپتوتيك سلول هاي سرطاني سينه - دانلود رایگان
دانلود رایگان گیاه مریم گلی با ارزش ترین نوع دارویی تیره نعناع و دارای اختصاصات درمانی مهمی است. این گیاه دارای خاصیت تسهیل کننده هضم، ضد تشنج، تب بر، ضد عفونی کننده، کا
دانلود رایگان
| مطالعه تغييرات آپوپتوتيك سلول هاي سرطاني سينه موش هاي صحرايي ماده تحت تاثير عصاره هيدروالكلي مريم گليچکیده گیاه مریم گلی با ارزش ترین نوع دارویی تیره نعناع و دارای اختصاصات درمانی مهمی است. این گیاه دارای خاصیت تسهیل کننده هضم، ضد تشنج، تب بر، ضد عفونی کننده، کاهش دهنده مقدار قند خون، آنتی اکسیدان و قاعده آور است. در این بررسی اثر عصاره هیدروالکلی مریم گلی بر بافت پستان طبیعی و توموری مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور 46 سر موش صحرایی ماده نژاد ویستار به 4 گروه شامل گروه تیمار شده با آب مقطر (کنترل)، گروه تیمار با عصاره هیدروالکلی مریم گلی و دو گروه القا سرطان تقسیم شدند. گروه کنترل 1 میلی لیتر آب مقطر و گروه دوم عصاره را با غلظتmg/kg 30 وزن بدن به مدت 30 روز به صورت خوراکی دریافت نمودند. سرطان به وسیله 20 میلی گرم DMBAدر 1 میلی لیتر روغن کنجد القا شد. گروه های القا سرطان با آب مقطر و عصاره هیدروالکلی مریم گلی به مدت 30 روز گاواژ شدند. موش های صحرایی در ماه های مختلف تشریح و بافت پستان ناحیه لگنی سمت راست از ناحیه نوک پستان تا ستون مهره از پوست جدا و بر روی لام گسترده شد. بعد از رنگ آمیزی گسترش ها با کارمین، تعداد جوانه های آلوئولی و لوبول های غده پستانی با میکروسکوپ نوری شمارش گردید. از بافت پستان لگنی سمت چپ و بافت های توموری مقاطع بافتی تهیه گردید و با استفاده از کیتTUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase x- dutp nick end labeling)سلول های آپوپتوتیک با میکروسکوپ نوری بررسی شد. تعداد جوانه های آلوئولی و لوبول ها در موش های صحرایی گروه تیمار با عصاره و گروه کنترل سرطان نسبت به گروه کنترل از افزایش معناداری برخوردار بود. این شاخص ها در گروه سرطانی تیمار با عصاره نسبت به گروه کنترل سرطان و گروه تیمار با عصاره کاهش معناداری نشان داد. سلول های توموری بافت پستان در گروه سرطانی تیمار با عصاره نسبت به گروه کنترل سرطان واکنش بیشتری با کیت TUNELنشان دادند. لذا میزان سلول های آپوپتوتیک تومورهای سرطانی تیمار شده با عصاره مریم گلی در مقایسه با گروه کنترل بیشتر بود. نتایج بیانگر اثرات بازدارنده عصاره هیدروالکلی مریم گلی بر رشد پیشرونده آلوئول های پستان و سلول های سرطانی پستان می باشد. مطالب فهرست عنوان صفحه فصل 1: مقدمه 1 1 1 – 1 - مفهوم سرطان 2 2– 2 - آمار سرطان 3 1 – 3 – سرطان پستان 4 1 – 4 – گیاهان دارویی و سرطان 5 1 – 4 – 1 - گیاه مریم گلی 5 1 – 4 – 2 – مشخصات گیاه شناسی 6 1 – 4 – 3 - خواص و کاربرد گیاه مریم گلی 7 1 – 4 – 4 – ترکیبات شیمیایی 81 – 5 – اهداف تحقیق 9 فصل 2: مروری بر تحقیقات پیشین 10 2- 1 – برخی از تحقیقات صورت گرفته بر مریم گلی 112 – 2 – اثرات آپوپتوزی مریم گلی 11 2 – 3 – اثرات ضد جهش زایی مریم گلی 12 2 - 4 – اثرات ضد رگ زایی مریم گلی 12 2 – 5 – اثرات ضد سرطان مریم گلی 13 فصل 3: وسایل، مواد و روش کار 15 3 – 1 – مواد 163 – 2 – وسایل 173 – 3 – روش کار 193 – 3 – 1 – حیوانات مورد آزمایش 19 3 – 3 – 2 – گروه بندی حیوانات 20 3 – 3 – 3 – تهیه داروی سرطان زا 21 3 – 3 – 4 – تهیه گیاه مریم گلی 23 3 – 3 – 5 – روش تجویز عصاره 26 3 – 3 – 6 – تهیه گسترش از کل غده پستانی 27 3 – 3 – 7 – تهیه مقاطع بافتی 32 3 – 3 – 8 – مراحل آماده سازی نمونه ها جهت روش TUNEL (Terminal deoxynucleotidyltransferase x-dUTP nick end labeling 35 3 – 3 – 9 – تجزیه و تحلیل داده ها 39 فصل 4: 40 4 – 1 – درصد بقا و مرگ و میر موش های صحرایی تیمار شده باDMBA...................41 4 – 2 – بررسی تومور های ایجاد شده در موش های صحرایی تیمار شده با DMBA ...............................................................................................................................................................42 4 – 3 – بررسی تغییرات وزنی حیوانات......................................................................................44 4 – 4 – مقایسه گسترش های غده پستان در گروه تیمار با عصاره هیدروالکلی مریم گلی........................................................................................................................................................46 4 – 5 - مقایسه گسترش های غده پستان در گروه القا سرطان پستان با DMBA.. ...............................................................................................................................................................48 4 – 6 - مقایسه گسترش های غده پستان در گروه کنترل القا سرطان پستان با DMBAو گروهالقا سرطان تیمار شده با عصاره هیدروالکلی مریم گلی...............................52 4 – 7 - مقایسه گروه تیمار شده با عصاره هیدروالکلی مریم گلی باگروه القا سرطان تیمار شده با عصاره هیدروالکلی مریم گلی.................................................................................56 4 – 8 - بررسی نتایج حاصل از روش رنگ آمیزی با TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase x- dutp nick end labeling).........................................60 فصل 5 : بحث و نتیجه گیری 62 5 – 1 - تفسیر نتایج حاصل از گسترش کل غده پستانی در گروه تیمار با عصاره هیدروالکلی مریم گلی......................................................................................................................63 5 – 2 - تفسیر نتایج حاصل از گسترش کل غده پستانی در گروه های القا سرطان با DMBA..........................................................................................................................................65 5 – 3 - تفسیر نتایج حاصل از گسترش غده پستانی در گروه کنترل القا سرطان با DMBA و گروه القا سرطان تیمار شده با عصاره هیدروالکلی مریم گلی.........................66 5 – 4 - تفسیر نتایج حاصل از گسترش کل غده پستانی گروه تیمار شده با عصاره هیدروالکلی مریم گلی با گروه القا سرطان تیمار شده با عصاره هیدروالکلی مریم گلی ..............................................................................................................................................................67 5 – 5 – تفسیر نتایج حاصل از مشاهده سلول های آپوپتوتیک در تومورهای پستان در موش های سرطانی گروه کنترل و تیمار با عصاره...............................................................68 5 – 6 – نتیجه گیری.....................................................................................................................70 5 – 7 – پیشنهادات برای مطالعات آینده..................................................................................71 5 – 8 – فهرست منابع و ماخذ....................................................................................................72 فهرست اشکال عنوان صفحه فصل 1 مقدمه 1– 1 - مفهوم سرطان سرطان به عنوان یکی از معضلات جوامع بشری با تهدید انسان ها در تمام گروههای سنی سبب خسارات مالی و جانی فراوانی می شود که کشور ما نیز از این قاعده مستثنی نیست. این بيماري با تغيير شكل غيرطبيعي سلولها واز دسترفتن تمايز سلولي مشخص مي شود و همچنین به عنوان یک بیماری فلج کننده و صعب العلاج در جامعه تلقی شده و فرد متعاقب تشخیص آن دچار مشكلات جسمي، رواني واجتماعي زيادي مي شود كه ممكن است باعث اختلال در روند کیفیت زندگی وی گردد (Bamshad & Safikhani., 2006).کورنر معتقد است که واژه سرطان به گروهی از بیماری ها اختصاص داده شده است که خصوصیات نسبتا مشترک دارند و این بیماری می تواند بافت ها و اندام های مختلف بدن انسان را درگیر کند(Corner &Balileyc., 2001). سه نوع عامل به تنهایی و یا به طور مشترک خطر ایجاد سرطان را در یک فرد افزایش می دهند که این سه عامل عبارتند از: نحوه زندگی٬ محیط و وراثت. تخمین زده می شود که نحوه زندگی و عوامل محیطی تقریبا در 90 درصد موارد در ایجاد سرطان دخالت دارند. این عوامل رفتارهایی هستند که هر فردی بر روی آن ها تا حدودی کنترل دارد مثل مصرف دخانیات٬ رژیم غذایی٬ استفاده از الکل، قرار گرفتن در معرض نور خورشید و بهداشت عمومی و فردی. بدین ترتیب به نظر می رسد که سرطان ها قابل پیشگیری هستند .(Etebary et al., 2002) در خصوص پیشگیری از سرطان ها لازم است عموم جامعه ازعلایم هشدار دهنده آنها اطلاع داشته باشند. این علائم شامل تغییر در دفع ادرار و مدفوع٬ زخمی که به راحتی خوب نشود و خونریزی غیر طبیعی٬ اشکال در بلع و هضم٬ تغییر در خال ها و زگیل ها٬ سرفه های خشک و صدا دار و کاهش سریع وزن بدن استet al., 2004) (Waller.تشخیص به موقع سرطان می تواند مرگ ومیر را کاهش دهد ودر این راستا باید به نقش و اهمیت آگاهی از هفت علامت هشدار دهنده سرطان توجه کرد .(Black & Hawakes., 2009) بار جهانی سرطان به علتپیری، رشد جمعیت، همچنین رفتارهای پرخطر بخصوص سیگار کشیدن و عوامل محیطی مختلف در حال افزایش است(Jemal et al., 2011, Ieaa., 2011).امروزه سرطان دومین عامل مرگ و میر در سراسر جهان به شمار می آید(www.who.int/mediacentre/news/releases/2005). در کشور هایی که از شیوه غربی پیروی می کنند٬ در حدود نیمی از مرگ ها به دلیل بیماری های قلبی و عروقی و در حدود یک چهارم مرگ ها به دلیل سرطان رخ می دهد. در نتیجه سرطان به عنوان یک مشکل مهم سلامت عمومی به شمار آمده و دولت ها را تحت تاثیر قرار می دهد(Boyle & Langman., 2000). در ایران نیز سرطان پس از بیماری های قلبی و عروقی٬ حوادث و سوانح سومین علت مرگ و میر به شمار می آید .(Alizadeh et al., 2000) 1 –2– آمار سرطان پیش بینی ها از روند رو به رشد تعداد مبتلایان به سرطان در جهان حکایت می کند. بر اساس گزارش سازمان بهداشت جهانی (WHO)انتظار می رود که آمار ابتلا از 10 میلیون نفر در سال 2000 به 15 میلیون نفر در سال 2020 خواهد رسید. شیوع بالای سرطان در ایران و کاهش سن ابتلا به این بیماری سخت و پر هزینه باعث شده که بر خی از متخصصین سرطان شناسی از اصطلاح سونامی سرطان برای نشان دادن شدت خسارت های مالی و جانی این بیماری در کشور استفاده کنند. طبق بر آورد سازمان بهداشت جهانی (WHO)سالانه حدود 70 هزار نفر به سرطان مبتلا می شوند. بر اساس آمار این سازمان در سال 1386 شمار مبتلایان به سرطان در کشور 70 هزار نفر بوده است. 1 – 3 – سرطان پستان سرطان پستان یکی از شایعترین انواع سرطان ها می باشد و علیرغم پیشرفت هایی که در تشخیص زود هنگام و درمان این بیماری صورت گرفته است٬ همچنان یکی از علل مهم مرگ و میر در بین زنان است(Mirmalek & Elhamkani., 2009). سرطان سینه بیماری است که در آن سلول های بدخیم از بافت سینه منشا گرفته و به طور نا منظم و فزایندهای تکثیر می یابند و بدون اینکه موجب عکس العمل تدافعی و تجمعی در سیستم ایمنی بدن شوند٬ از آن عبور می کنند. سرطان سینه اکثر اوقات به صورت یک توده بدون درد و سفتی در قسمت فوقانی و خارجی سینه شروع می شود وبه طور کلی می تواند در هر جایی از سینه از جمله نوک آن ایجاد گردد. سرطان سینه ممکن است به غدد لنفاوی ناحیه گودی زیر بغل سرایت کرده و بعد از آن در سر تا سر بدن گسترش پیدا کند (عنصری و رعنا پور، 1390). سرطان پستان 16 درصد کل سرطانزنان را تشکیل می دهد و شایعترین سرطان زنان در جهان می باشد accessed oct. 2010)/.(www.who.intطبق آمار جهانی از هر 100 هزار نفر٬ 80 نفر به این بیماری مبتلا هستند. این بیماری دومین علت مرگ ناشی از سرطان زنان بعد از سرطان ریه به شماررفته (Ries et al., 2005) و سالیانه موجب مرگ 519 هزار نفر در جهان میشود که بیش از 70 درصد موارد در کشورهای دارای وضعیت اقتصادی پایین و متوسط رخ می دهد .(World Health Organization accessedOct.2010) میزان بقا سرطان پستان در بین کشورهای جهان بسیار متفاوت است به طوری که در آمریکای شمالی٬ سوئد و ژاپن 80 درصد٬ در کشور های با درآمد متوسط 60 درصد و در کشورهای دارای درآمد پایین کمتر از 40 درصد متغییر است Coleman et al., 2008)) که ناشی از عدم وجود برنامه های تشخیص زودرس و کمبود تسهیلات تشخیصی و درمانی کافی در کشورهای با درآمد پایین می باشد. ایران یکی از کشورهایی است که میزان بروز سرطان پستان کمتری نسبت به بقیه کشورها دارد اما افزایش میزان بروز آن در سال های اخیر این بیماری را به عنوان رایج ترین بدخیمی در میان زنان ایرانی نشان داده است(Mousavi et al., 2007) . بر اساس آخرین گزارش نظام ثبت سرطان کشور در سال٬1387 سرطان پستان با فراوانی نسبی 8/24 درصد از سرطان زنان٬ شایعترین سرطان این جنس را تشکیل می دهد. سن ابتلا به سرطان پستان در ایران 10 سال زودتر از کشورهای پیشرفته بوده به نحوی که شایعترین سن ابتلا در ایران 54-45 سال است(Sadjadi et al., 2009). 1 – 4 – گیاهان دارویی و سرطان طب سنتی ایران از پایه های قدیمی علم طب و حاوی اطلاعات گرانبها در بکارگیری گیاهان در درمان می باشد.استقبال گستردهای از طب سنتی و داروهای گیاهی در زمینه های مختلف علوم پزشکی صورت گرفته است که علت آن٬کاربرد گیاهان به عنوان دارو از قرن های پیشین می باشد((Fabrican & Farnsworth., 2001.بهره گیری از طب سنتی یکی از راه های دستیابی به داروهای جدید می باشد در حال حاضر 119 دارو با منشا گیاهی وجود دارد که تنها از 90 گونه از بین 000/250 گونه شناخته شده٬به دست آمده است(Farnworth., 1990).اما جستجوی سیستماتیک بر روی مواد موثره این گیاهان و تمامی بیماریها امری بسیار طولانی٬ هزینه بر و محال می باشد (Farnworth., 1990). بنابراین تکیه بر آموزه های بومی یکی از استراتژی های مقبول در دنیا در کشف٬ کاربرد و تحقیق در مورد گیاهان دارویی است. لذا با توجه به روش های درمان دارویی طب سنتی ایران٬ یافتن منابع نوین دارویی از مراجع این دانش در درمان بیماری سرطان پستان ضروری به نظر می رسد. 1 – 4 – 1 - گیاه مریم گلی گیاه مریم گلی با نام علمی (Salvia officinalis) متعلق به خانواده نعناعیان (Lamiaceae) می باشد. در زبان فارسی به این گیاه مریمی و مریم گلی می گویند. در کتب سنتی و عربی مریمیه٬ شالبیه و مریمیه صغیره٬ به فرانسوی Saugeو به انگلیسی Common sage می نامند. این خانواده حدوداً شامل 700 گونه در جهان می باشد) Heywood., 1985, Evan., 1996, Grainger & .(Wichtl., 2001برخی از گونه های این گیاه شاملSalviaacuminate, Salvia absconditiflora, Salviaaequidistanمی باشد. این جنسپراکندگی وسیعی در فلور گیاهی کشورمان داشته به طوری که تا کنون حدود 58 گونه گیاه مریم گلی در ایران شناسایی و گزارش شده است که از این میان تعداد بالغ بر 17 گونه اندمیک می باشد .(Rechinger., 1967) 1 – 4 – 2 - مشخصات گیاه شناسی مریم گلی٬ گیاهی گلدار٬ نهاندانه٬ دولپه ای و بوته ای شکلو چند ساله است.طول این گیاه به 30 تا 60 سانتی متر می رسد٬گلهای آن فقط دو پرچم دارد و به رنگ سفید یا آبی مایل به بنفش است و سه یا چهار تای آن ها پهلوی هم قرار می گیرند. برگ های متقابل به رنگ سبز روشن (به علت دارا بودن تارهای کوتاه وسفید رنگ)٬ضخیم و دارای شبکه ای از رگبرگ ها است. این رگبرگ ها در سطح تحتانی پهنک برگ به وضع برجسته با ظاهری کاملاً مشخص جلوه می کند. برگ های قسمت زیرین آن دارای دمبرگ نسبتاً بلند و برگ های بالائی کوچک و نوک تیز است. میوه کپسول وبه رنگ قهوه ای روشن یا قهوه ای تیره است (درویش٬ 1346; زرگری، 1371) (شکل1-1). این گیاه به صورت خودرو در اماکن خشک و سنگلاخی و دامنه های بایر غالب نواحی آسیا وشمال آفریقا می روید. مناطقی که از نظر کشت مناسب گزارش شده است عبارتند از استان فارس و خراسان (زرگری، 1371). پرورش مریم گلی باید در زمینهای اصلاح شده، قابل نفوذ، حاصلخیز و نسبتا" مرطوب صورت گیرد. بهترین رشد آن در خاکهای رسی غنی و زهکش دار صورت می گیردو اراضی رو به آفتاب را ترجیح می دهد. گیاهی است مدیترانه ای که در طول رویش به گرما و هوای خشک نیازدارد. مقاومت آن به گرما زیاد است. این گیاه در زمستان در دمای پایین تر از ۱۵- درجه سانتیگراد دچار سرمازدگی شده و طی ۶-۵ روز خشک می شود. هوای گرم وخاک هایی با بافت متوسط که حاوی مقادیر مناسبی ترکیبات کلسیم باشند برای رشد آن مناسب بوده و در افزایش مواد موثره گیاه نقش زیادی دارد. خاکهای شنی و فقیر از عناصر غذایی، مناطق سرد و رطوبت فراوان از عوامل محدود کننده رشد این گیاه هستند. محدوده pH خاک برای کشت مریم گلی ۲/۸-۹/۴ است که pH مناسب آن ۴/۶ می باشد. این گیاه ۷- ۵ سال عمر می کند و تا ۴ سال بازدهی اقتصادی دارد. شکل 1 – 1 - گیاه مریم گلی A) شکل گیاه B) شمای کلی گیاه C) برگ گیاه 1 – 4 – 3 - خواص و کاربرد گیاه مریم گلی اين گياه با ارزش ترين نوع دارويي تيره نعناع و داراي اختصاصات درماني مهمي است. برگ آن به علت دارا بودن اسانس و تانن مقوي است. به علاوه داراي خاصيت تسهيل كننده هضم، ضدتشنج، تب بر، ضدعفوني كننده،كاهش دهنده مقدار قند خون و قاعده آور است (Levey., .(1993,Silvabrumetal.,2001همچنين اين گياه در درمان بيماري هاي نقرس، رماتيسم مزمن، آلزايمر، سرگيجه هاي عصبي، سردردهاي با منشاي عصبي يا ناشي ازسوء هاضمه، سرماخوردگي و دردهاي ناحيه شكمي اثرات نافع دارد )Levey., 1993, Yoshikawa et al., .(2000, Silvabrum et al., 2001 در بعضي نواحي نيز آن را جهت معطر ساختن سركه، گوشت و سس به كار مي برند و ترکیبات موجود در عصاره آن نیز اثر آنتی اکسیدانی دارند Yinrong & Yeap., 2001, Wong & Kitts.,) (2006, Duling et al., 2007. 1 – 4 – 4 - ترکیبات شیمیایی برگ گياه مريم گلي در مقايسه با ساير گونه ها بيشترين مقدار اسانس را توليد مي كند كه طبق مطالعات مورفولوژيكي مربوط به چهار نوع متفاوت غده ويژه تري كوزوم بر سطح برگ هاي گياه است.(Hohmann & Blunden., 2003) اسانس مريم گلي بر اساس نوع گونه، سن گياه و تحت فاكتورهاي محيطي مانند نور و درجه حرارت تغيير مي كندLu & Foo.,) .(Sayyah et al., 2002, 2002). تركيبات اسانس برگ گياه مريم گلي شامل فلاون ها، فنوليك اسيد، گليكوزيدهاي فنيل پروپانوئيد، تري ترپنوييدها و دي ترپن ها كه شامل فنوليك و كوئينوايدال است(Grando et al., 1993) و از ترکیبات این گیاه می توان به آلفا – توجون (48/41%)، بورنئول (88/3%)، 1و 8 سینئول (94/7 %)، بتا – توجون (75/6%)، کامفن (46/3%)، آلفا پینن (24/3%)، بتا – پینن (25/2%)، آلفا هومولن (64/2%) اشاره کرد.(Alizade & Shaabani., 2012)همچنين اسانس برخي گونه های مريم گلي خواصآنتي اكسيدان و محافظت كننده كبدي دارد، هر چند كه پتانسيلاثرات محافظ كبدي اسانس برگ گياه مريم گلي هنوز ناشناختهباقي مانده استCarr &) (Nagy., 1993 .گزارش شده است كه عصاره و اسانسمريم گلي هر دو كاهنده فشار خون بوده و خواصضد افسردگي، ضد التهاب، ضد اسپاسم دارند .(Asongalem et al., 2004) طبقتحقيقات به عمل آمده اين گياه به خاطر دارا بودن درصد بالايتركيبات فنوليك و فلاونوييدي به عنوان تركيبات ضد التهاب،ضد تشنج و آنتي اكسيدان شناخته شده است.(Millan., 1999, Levey., 1993) 1 – 5 – اهداف تحقیق پرورش گياهاندارويي در ايران از موقعيت خوبي برخوردار است و عوارض جانبي و سمي گياهان دارويي (درصورت کاربرد صحيح)، در مقايسه با داروهاي شيمياييصناعي، بسيار ناچيز و در بسياري موارد، قابل چشم پوشياست. بر اين اساس، سعي شده است تا با مطالعه ی تأثير عصاره ی هيدروالکلي مريم گلي، بتوان اثر ضد سرطان پستان آن را مورد مطالعه قرار داده و در صورت اثبات، اين خود مقدمهاي جهت مطالعههاي بعدي و زيربنايي براي امکان کاربرد آتي آن به عنوان يک داروي ضد سرطان مستقل و يا همراه با ديگر ترکيبات ضد سرطان می باشد. دریافت فایل جهت کپی مطلب از ctrl+A استفاده نمایید نماید |