بهینه سازی باکتریهای تولید کننده آنزیم l Asparginase - دانلود رایگان
دانلود رایگان در این تحقیق روش تخمیر در بستر جامد به منظور تولید آسپارژیناز توسط سویه جداسازی شده از جنس باسیلوس با استفاده از سبوس برنج انجام گردید
دانلود رایگان
| بهینه سازی باکتریهای تولید کننده آنزیم l Asparginase در بستر جامد با استفاده از روش Resoponse surface methodologyفهرست مطالب فصل اول:کلیات پژوهش2 فصل دوم:ادبیات و سوابق تحقیق19 فصل سوم:مواد و روش های تحقیق24 فصل چهارم:نتایج44 فصل پنجم:بحث و نتیجه گیری61 فهرست جداول فهرست نمودارها فهرست اشکال چکیده در این تحقیق روش تخمیر در بستر جامد به منظور تولید آسپارژیناز توسط سویه جداسازی شده از جنس باسیلوس با استفاده از سبوس برنج انجام گردید.بررسی اولیه با استفاده از طراحی Plackett-Burman نشان داد که از میان منابع کربن مورد آزمایش شامل: سبوس برنج، سبوس گندم، ساقه برنج، ساقه گندم ،سبوس برنج بهترین تأثیر را در افزایش تولید آنزیم واز میان منابع نیتروژن مورد آزمایش شامل: آسپاراژین، عصاره مخمر، پپتون ، تریپتون، آسپاراژین بهترین تأثیر در افزایش تولید آسپارژیناز را در بستر جامد نشان دادند(05/0>p). در مرحله بعدی بهینه سازی طی بررسی4فاکتور سبوس برنج، آسپارژین، دمای انکوباسیون، زمان انکوباسیون در 5 سطح بر تولید آسپارژینازبا بکار گیری روش RSM مقدار تولید آنزیم U/g24/69 حاصل شد. در بستر جامد میزان تولید آنزیم در مقایسه با بکارگیری طراحی آزمایش به روش Plackett-Burman و RSM 3 برابر حاصل شد. همچنین تحقیقات برای تعیین ویژگی های آنزیم آسپارژیناز تولید شده توسط سویه باکتریایی جداسازی شده انجام پذیرفت. حداکثر میزان تولید آنزیم تجربی بدست آمده در بستر جامد در میزان غلظت سبوس برنج5/1 درصد وزنی-وزنی، میزان غلظت آسپاراژین 5/0 درصد وزنی-وزنی، دمای 30 درجه سانتی گراد، و مدت زمان 72 ساعت بود.نتایج حاکی از اهمیت تولید آسپارژیناز در بستر جامد با استفاده از سوبسترای ضایعات سبوس برنج به دلیل قیمت ارزان و قابلیت دسترسی فراوان و پتانسیل بالا در تولید آنزیم است. کلمات کلیدی: بهینه سازی، ضایعات سبوس برنج، تخمیر در بستر جامد فصل اول: کلیات پژوهش مقدمه: E.coli و Erwinia بهترین نوع داروی ضد سرطان است. آسپارژیناز هم چنین به عنوان دارو با نام تجاری ال آسپار برای درمان لوسمی حاد لنفوبلاستیک به کار می رود. بر خلاف سایر داروهای مورد استفاده در درمان لوسمی حاد لنفوبلاستیک، آسپارژیناز را می توان به صورت درون عضلانی و داخل وریدی بدون ترس از تحریک بافت به کار برد.در این پژوهش به بررسی تولید آنزیم ال آسپارژیناز در باکتری های جدا شده از خاک و بررسی فعالیت آنزیمی آن ها به روش RSM پرداخته شده است. 1-1- اهداف پژوهش 1-2- فرضیه های پژوهش 1-3- پرسش های پژوهش 1-4- تعریف اصطلاحات و واژگان تحقیق 1-4-1- آنزيم ها و ساختار آن ها 6تا 1012 افزايش داده و اين امكان را ايجاد كنند كه واكنش ها در دماي عادي سلول انجام بگيرد. 1-4-2- مكانيسم عمل آنزيم ها 1-4-3- عوامل موثر بر فعاليت آنزيم ها 1-4-4- انواع آنزيم 1-4-5- آنزيم هاي ميكروبي و انواع آن ها 1-4-6- معرفي آنزيم ال-آسپارژيناز 1-4-7- منابع توليد آنزيم ال آسپارژيناز
باكتري E.coli دو نوع ال آسپارژيناز توليد مي كند: ال آسپارژيناز I كه در سيتوپلاسم يافت مي شود و ال آسپارژيناز II كه در فضاي پريپلاسمي وجود دارد. اين دو نوع آنزيم از لحاظ شرايطي كه در آن ساخته مي شوند با هم متفاوت هستند. ال آسپارژيناز I به صورت پيوسته سنتز مي شود و ال آسپارژيناز II تحت شرايط بي هوازي و محيط هاي با تراكم بالاي آمينو اسيد و حضور مقادير ناچيز يا به طور كلي غياب قندها ساخته مي شود. بنابراين وقتي باكتري به صورت هوازي در محيط حاوي گلوكز رشد مي كند فقط آنزيم سيتوپلاسمي را توليد مي كند. اين آنزيم به E.coli اجازه مي دهد تا ال آسپارژيناز را به عنوان منبع خالص نيتروژن استفاده كند.[16] E.coli يا EcAII تمايل شديدي به پيوند با سوبسترا دارد و Km آن برابر با 5-10*15/1است. در حالي كه EcAI تمايل كمتري به سوبسترا دارد و بنابراين براي مقاصد درماني در زمينه سرطان مناسب نيست.[17] 1-4-8- مكانيسم عمل و ساختار آنزيم ال آسپارژيناز E.coli و ، Erwinia carotovora مورد شناسايي و بررسي قرار گرفته است. هر دوي اين آنزيم ها به صورت هموتترامر فعال هستند؛ هر دوي اين آنزيم ها داراي چهار زير واحد مشخص 326 واحدي هستند. در هر يك از چهار جايگاه فعال يك مولكول محصول واكنش ال آسپارژين متصل شده است كه تعيين كننده تقابل ميان آنزيم و سوبسترا است. E.coliساختار كريستالي حاوي چهار مولكول ال آسپارتات است، كه هر يك به يك جايگاه فعال متصل هستند.[18] 1-4-9- خاك و ميكروفلور آن 0.2-2 mm)) شامل نماتودها، مايت ها، ميراپدها، حشرات بدون بال، حلزون ها و برخي گياهان ريز (>2 mm) كرم هاي خاكي، حشرات بزرگ تر، جوندگاني مانند موش و ريشه گياهان بزرگ .[23] 1-4-10- تخمیر در بستر جامد Contiothyrium minitans برای کنترل بیولوژیکی قارچ بیماری زای گیاهی Slcerotinia sclerotiorum به کار می رود. w= را تحمل می کنند[24] 1-4-10-1- سوبستراهای مورد استفاده برای تولید آنزیم در بستر جامد دریافت فایل جهت کپی مطلب از ctrl+A استفاده نمایید نماید |